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蛋白实验

高效反相液相色谱操作步骤流程

高效反相液相色谱操作步骤流程
01.实验方法原理反相色谱(reversed phasc chromatography, RPC)是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高,在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式,在生物大分子的反相液相色谱条件下,流动相多采用酸性的、低离子强度的水……继续阅读 »

bionav 11个月前 (06-12) 2722浏览 0评论0个赞

双向电泳操作步骤流程

双向电泳操作步骤流程
01.实验方法原理双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电泳和 SDS-PAGE 的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照 pI 分离),然后再进行 SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。图片来源于网络02.实验材料ddH2O;溴酚蓝指示剂;矿物油;丙烯酰胺;乙醇;Mil……继续阅读 »

bionav 11个月前 (06-12) 1882浏览 0评论0个赞

免疫共沉淀(Co-IP)实验详细流程

免疫共沉淀(Co-IP)实验详细流程
01.实验方法原理以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质 X 的抗体免疫沉淀 X,那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下来。目前多用精制的 prorei……继续阅读 »

bionav 11个月前 (06-12) 1500浏览 0评论0个赞

蛋白质的表达、分离、纯化实验详细流程

蛋白质的表达、分离、纯化实验详细流程
01.实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌 BL21 中,在 37℃,IPTG 诱导下,超量表达携带有 6 个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。图片来源于网……继续阅读 »

bionav 11个月前 (06-12) 1304浏览 0评论0个赞

UniProt数据库在WesternBlot实验中的作用

UniProt数据库在WesternBlot实验中的作用
01.判断目标蛋白的募集位置以人(HUMAN)来源的蛋白转录因子 P65 为例,通过查询它的 subcellular location 可以得知其其表达聚集的地方是细胞质和细胞核。这样可以初步筛选合适的裂解液,比如全细胞裂解液。如果有些蛋白表达在细胞膜上,则可以选择适合膜裂解的裂解液。这样做的目的是提高蛋白提取率,方便后续蛋白的检测。 0……继续阅读 »

bionav 1年前 (2021-04-19) 1084浏览 0评论0个赞

western blot详细实验步骤

western blot详细实验步骤
图片来源于网络01.样品处理及 BCA 定量由于蛋白酶抑制剂可影响蛋白定量,且新鲜蛋白很少降解,故可不加,如加按建议比例即可。提取磷酸化的蛋白还需加 Na3VO4 0.1mM 及 NaF 25mM)。注意 SDS 终浓度勿超过 10%。对于心脏,肌肉等碎屑较多的组织可用 5%的 SDS,肝肾等组织 2%即可。培养的细胞(定性)1. 去培养液后用温……继续阅读 »

bionav 1年前 (2021-04-11) 2438浏览 0评论2个赞

WB条形不好看?这些制胶细节你都注意了么?

WB条形不好看?这些制胶细节你都注意了么?
嗨咯!大家好,我是忘忧君,第一次跟大家见面,有点紧张,讲的不好的地方欢迎留言探讨。SDS 凝胶的试剂以及配方在这里我就不多赘述了,大家都了然于胸了,再多讲就是啰嗦,浪费大家的时间。好了,废话不多说,进入正题,先放上我制备的胶做出来的WB显影图,所谓没图没真相,不能空白(口)无凭。相信大家在实验中或多或少总会出现一些条带不美观的图,比如下面列举的:&……继续阅读 »

bionav 1年前 (2021-04-03) 2410浏览 0评论1个赞