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分子实验

血基因组DNA提取实验详细流程

血基因组DNA提取实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶 K 裂解)从抗凝全血中得到基因组 DNA。02.实验材料抗凝全血03.试剂、试剂盒血基因组 DNA 试剂盒04.仪器、耗材96 孔深孔板;96 圆孔板;96 孔 DNA 制备板;96 圆孔硅胶片;BF-400 膜05.实验详细操作步骤“一、试剂盒组成……继续阅读 »

bionav 2年前 (2021-05-24) 1706浏览 0评论0个赞

DNA酶切实验详细流程

DNA酶切实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理采用粘末端连接必须对目的 DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决:1、先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收 DNA分子后再用另外一种酶切;2、先进行低盐要……继续阅读 »

bionav 2年前 (2021-05-18) 1480浏览 0评论0个赞

cDNA文库构建详细流程

cDNA文库构建详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。 经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。 其基本步骤包括:(1)mRNA 的……继续阅读 »

bionav 2年前 (2021-05-17) 1434浏览 0评论0个赞

变性梯度凝胶电泳 实验详细流程

变性梯度凝胶电泳 实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理1. 变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据 DNA 片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸 50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm 值主要取决于DNA分子中 GC 含量的多少。DGGE 将凝胶设置在双重变性条件下:温度 50-60 ℃,变性剂 0-100%。……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-05-02) 2329浏览 0评论0个赞

动物DNA提取实验详细流程

动物DNA提取实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理在浓氯化钠(1-2 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。02.实验材料小白鼠肝脏03.试剂、试剂盒N……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-30) 2388浏览 0评论0个赞

琼脂糖凝胶电泳实验详细流程

琼脂糖凝胶电泳实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-30) 1885浏览 0评论0个赞

荧光原位杂交实验实验详细流程

荧光原位杂交实验实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于 DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。02.实验材料人的 MyoD1(MYF3)基因探针;人外周血中期染色体细胞标本03……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-30) 3278浏览 1评论4个赞

染色质免疫共沉淀(ChIP)实验详细流程

染色质免疫共沉淀(ChIP)实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。IP 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白的 FC 片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的 prorein A 预先结合固化在 argarose……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-24) 2124浏览 0评论0个赞

凝胶迁移实验(EMSA)实验详细流程

凝胶迁移实验(EMSA)实验详细流程
图片来源于网络01.实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究 RNA 结合蛋白和特定的 RNA 序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和 32P 同位素标记的DNA或 RNA 探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-24) 3582浏览 0评论0个赞

大肠杆菌转化实验操作步骤(热激法)

大肠杆菌转化实验操作步骤(热激法)
图片来源于网络01.实验方法原理质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过 42 摄氏度短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。 02.实验材料质粒DNA;重组DNA03.试剂、试剂盒LB 培养基;蒸馏水;IPTG;X-gal;氨苄青霉素04……继续阅读 »

忘忧君 2年前 (2021-04-24) 2251浏览 0评论0个赞