嗨咯！大家好，我是忘忧君，第一次跟大家见面，有点紧张，讲的不好的地方欢迎留言探讨。
SDS 凝胶的试剂以及配方在这里我就不多赘述了，大家都了然于胸了，再多讲就是啰嗦，浪费大家的时间。
好了，废话不多说，进入正题，先放上我制备的胶做出来的WB显影图，所谓没图没真相，不能空白（口）无凭。
相信大家在实验中或多或少总会出现一些条带不美观的图，比如下面列举的：
图 1 条带紧靠
图 2 边缘效应
图 3 微笑型条带
图 4 漏液
图 1 应该是比较容易出现的，原因在于浓缩胶过长（1cm 以上）使蛋白在浓缩胶中迁移的时间比较长，由于其孔径结构比较大，蛋白很容易横向迁移，最后造成条带变宽。
图 2 是实验中经常出现的，大家也都知道它（边缘效应）。通常我们常规的做法就是避免使用第一孔和第十孔。但是有时候我们可能有 9 个样品，但是又不想用 15 孔胶怎么办? 其实解决这个问题很简单，只要理解它造成的原因就很容易做出 9 孔都漂亮的条带图。
造成边缘效应很大的原因是电流不均衡，这是仪器本身的构造造成的，不可避免。但是大量的实验中，我们发现，蛋白在凝胶中迁移的距离越短，其条带变形的幅度越少，所以，想要漂亮的 9 孔条带图，可以让目标分子迁移距离变短即可。
图 5 边缘效应
图 6 短距离跑胶
图 3 和图 1 是孪生兄弟，都是条带宽。但是造成图 3 的情况跟图 1 完全不一样，图 3 并不是浓缩胶过长，而是梳孔本来就宽。原因在于浓缩胶制备好之后，没有及时将胶放入电泳槽中，凝胶因失水收缩，梳孔变宽，且孔两边是凹进去的。在电场的情况下，两边和中间的电流不均衡，中间的电流稍微强一点，条带有点向中间靠，最终造成上宽下窄的情况。
图 4 是实验中最不常见的漏液情况（蛋白样品从胶与玻璃间隙流出），其原因不外乎两种，第一,玻璃不干净，有残渣；第二，点样过程中，枪头插入过深，挤开了玻璃，造成蛋白液漏出。相比于这种不常见的，比较常见的另一种漏液（勉强算的上），点样孔上有气泡，蛋白样品渗入气泡中，最后造成条带突出一个小黑包。所以，正常的做法是玻璃不能有残渣剩余，梳子倾斜一定角度插入浓缩胶中，让气泡从一边冒出。
问题都分析完了，但是我们怎么做好一块完美的胶呢？
根据我 1000 多天的制胶经验，制备完美胶会遇到的两大杀手：温度和 AP。稍微有点实验经验的都知道，SDS 凝胶凝固的速度跟温度有关，温度越高凝胶凝固的速度越快。因此，夏天和冬天是我们必须注意的时间点。
夏天温度高，灌胶速度慢了很可能会在插梳子的时候直接凝固了，因此，要么你手速够快，要么减少 AP 的浓度来降低凝固速度。或者你用 10ml 抢来灌胶（简直是神器）。也可以将 30%的甲叉双丙烯酰胺，水，Tri-Hcl 和 10%SDS 按照比例混合（4℃一个月没问题），使用时取出一定体积，然后加入 AP 和 TEMED 即可。（特别是胶数量多的情况）。
图 7 大枪灌胶
冬天温度低，凝胶速度过慢，很容易使分离胶缓慢流出玻璃外使分离胶变短，最终造成图 1 的结果。根据经验的积累，一般时间在 30-40min 是比较好的凝固时间，如果超出这个时间，就要检测是否是温度过低还是 AP 效果不佳了。温度低的情况下可以加 2 倍的 AP 来观察凝胶情况，如果 2 倍 AP 都没发让胶在最佳时间段凝固，则需要检测 AP 是否失效了。未失效的 AP 呈颗粒分明的状态，不聚团，如图 8 所示，而失效的 AP，会成块状。若出现成团 AP，则需要更换 AP。
图 8 正常 AP
凝胶凝固时间，温度和 AP 都注意的话，只需要按照正常操作即可。另外，插好梳子等浓缩胶凝固完全之后，记得将胶置于电泳槽中，避免凝胶失水，造成凝胶性质变差。
最后，祝大家学业有成，实验顺利！ 
